陽離子脂質：某些陽離子脂質體可能與細胞內的生物分子發生非特異性結合，干擾細胞正常代謝。例如，它們可能與細胞膜上的陰離子磷脂相互作用，改變細胞膜的通透性和穩定性。

輔助脂質：輔助脂質的種類和比例也可能影響細胞毒性。不合適的輔助脂質可能導致脂質體的穩定性下降，增加對細胞的損傷。

過量使用轉染試劑會使細胞暴露在高濃度的脂質體中，增加細胞負擔。這可能導致細胞膜過度受損，影響細胞的正常生理功能。

不同細胞類型對轉染試劑的耐受程度不同，因此需要根據具體細胞類型優化轉染試劑的用量。

過長的轉染時間會使細胞持續暴露在轉染試劑中，增加細胞毒性的風險。細胞可能無法及時恢復正常狀態，導致代謝紊亂和功能受損。

核酸的大小、結構和濃度也可能影響細胞毒性。較大的核酸分子可能更難被細胞攝取，導致轉染試劑在細胞內積累，增加毒性。

高濃度的核酸可能與轉染試劑形成更緊密的復合物，增加對細胞的損傷。

不同的細胞類型對脂質體轉染試劑的敏感性不同。一些細胞可能具有較高的耐受性，而另一些細胞則更容易受到毒性影響。

細胞的生長狀態也會影響其對轉染試劑的反應。處于對數生長期的細胞通常更健康，對毒性的耐受性可能相對較高。

選擇多種不同類型的細胞系，如哺乳動物細胞、昆蟲細胞等，確保細胞處于良好的生長狀態。

使用合適的培養基和培養條件，維持細胞的正常生理功能。

設置不同濃度的脂質體轉染試劑組，包括低、中、高濃度。

設立對照組，使用不含轉染試劑的細胞進行培養。

可以設置陽性對照組，使用已知具有細胞毒性的物質處理細胞，以驗證實驗方法的可靠性。

按照實驗設計，將不同濃度的轉染試劑與核酸物質混合，制備脂質體 - 核酸復合物。

將復合物加入到細胞培養體系中，進行轉染。注意控制轉染時間和條件。

細胞存活率測定：采用 MTT 法、CCK-8 法等檢測細胞的代謝活性，間接反映細胞存活率。

細胞形態觀察：使用顯微鏡觀察細胞的形態變化，如細胞皺縮、變形等。

凋亡檢測：通過流式細胞術、TUNEL 染色等方法檢測細胞凋亡情況。

其他指標檢測：如檢測細胞內活性氧水平、線粒體膜電位等，評估細胞的氧化應激和能量代謝狀態。